PPS蛋白层析系统助力葡聚糖接枝型Protein_A介质的层析性能提升

  本工作中，PPS蛋白层析系统以其准确的流速和压力，高灵敏的紫外检测，以及系统的高耐受性，展现了很大的应用价值，从而加快了新型葡聚糖接枝型Protein_A介质的开发进程。

  治疗性单克隆抗体(单抗)凭借其良好的治疗效果在医药领域越来越受到重视. Protein A介质亲和层析因操作简单、高效等优势已成为抗体药物研发和生产阶段的核心纯化步骤. 为提高单抗纯化效率、降低纯化成本，高载量、良好的传质性能和稳定性能一直是研究者追求的目标，这些性能与介质结构密切相关. 介质的结构主要包括基质和配基两方面，琼脂糖层析介质具有良好的亲水性、稳定性及孔道结构等，是迄今为止应用最广泛的层析介质之一. 提高Protein A介质在线清洗(Cleaning-in-place, CIP)过程中的碱耐受性是提高介质纯化效率、降低介质使用成本的关键. 市场上广泛应用的进口抗体介质MabSelect SuRe以高交联琼脂糖微球为基质，以基因工程改造耐碱型Protein A为配基，可耐受0.5 mol/L NaOH溶液的100次清洗并保持良好的稳定性. 国产抗体介质往往存在载量不高、使用寿命短的缺陷.

  在琼脂糖层析介质制备过程中引入葡聚糖，介质载量和稳定性都有很大程度提高. 葡聚糖接枝型离子交换介质SP-SEP的静态吸附量提高了54%-78%，动态吸附量增加了1.5-1.88倍. 在离子交换介质上接枝葡聚糖能有效增强蛋白传质速率，但在亲和介质制备过程中引入葡聚糖尚无报道.

  本工作在Protein A介质制备过程中引入葡聚糖，通过与常规Protein A介质及市售Mabselect SuRe介质比较，研究葡聚糖接枝过程对Protein A介质载量和稳定性能的提升效果.

  利用PPS 100 蛋白层析系统，对新型接枝型Protein A介质进行了一系列性能研究和同类产品的对比，主要内容包括：（1）压力-流速曲线；（2）介质载量测定；（3）碱清洗的稳定性.

  （1）利用PPS 100 蛋白层析系统测定的压力流速曲线表明接枝型Protein A介质比常规Protein A介质最大流速增加约32%.

  （2）接枝型Protien A介质的动态载量为60.6 mg/mL，较常规Protein A介质提高22%，与Mabselect SuRe非常接近.

  （3）用0.5 mol/L NaOH清洗40次后，接枝型Protien A介质与Mabselect SuRe清洗稳定性相当，载量均为原始载量的92%以上，较常规Protein A介质有明显提升.

研究内容详见：

朱凯, 赵岚, 黄永东, 李强, 邱晗, 王启宝, 苏志国, 马光辉. 葡聚糖接枝型耐碱Protein A介质的层析性能提升研究[J]. 过程工程学报, 2016, 16(5): 856-861.